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本试剂盒采用改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase-free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

• 离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
  
• 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
  
• 独有的RLS裂解液配方，可直接裂解全血，不需要先裂解去除红细胞。
  
• 多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。
  
• 有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

• 因此运输和储存均在室温下(15～25℃)进行。裂解液RLS可以常温运输，收到后4℃避光可长期保存，常温保存3个月也不影响使用质量。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

• 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
  
• 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。
  
• 裂解液RLS和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
  
• 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿，使用前需要自备氯仿。
  
• 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5kb(28S)，~2kb(18S)，条带亮度比值约为2∶1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4、5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7kb和15kb之间的不连续的高分子量条带。
  
• 检测OD₂₆₀/OD₂₈₀吸光度比值时，如需稀释RNA样品应该用TE(pH8.0)，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD₂₈₀升高，从而使比值降低。
  
• 加入裂解液RLS匀浆后，加氯仿前，样品可在-70℃保存一个月以上。
  
• 若提取细菌RNA，推荐细菌RNA提取试剂盒(货号：ALH027)和细菌RNA提取试剂盒(柱式吸附去除DNA，货号：ALH029)

• 取250μL血液(或血清，血浆，脑脊液等等)加入750μL裂解液RLS，用加样枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。裂解液RLS和液体样品的终体积比总是3∶1。
  
• 将样品剧烈震荡混匀后，在室温静置5分钟以使核蛋白体完全分解。
  
• 加0.2mL氯仿，剧烈振荡15秒并室温静置2分钟。
  
• 于4℃ 13000rpm离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RLS体积的60%，把水相转移到新管中，进行下一步操作。
  
• 加入0.5倍体积无水乙醇，颠倒混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内)。
  
• 室温(以下步骤均为室温)13000rpm离心30秒，弃掉废液，将吸附柱重新套回收集管。
  
• 加500μL去蛋白液RE，12000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12000rpm离心15秒，弃掉废液。
  
• 重复一遍步骤8。
  
• 将吸附柱RA放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  
• 取出吸附柱RA，放入一个RNase-free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30～50μL RNase-free water(事先在65～70℃水浴中加热效果更好)，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟，，或者另外再加30μL RNase-free water，离心1分钟，合并两次洗脱液。
  如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积最好不少于30μL，体积过小降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。